種從固相樹(shù)脂上切除多肽的方法
固相Fmoc化學(xué)合成多肽后，切割的方法有很多，現(xiàn)在介紹兩種我們大家常用的基本類型。
1、強(qiáng)酸法（常用TFA）
將干樹(shù)脂放在一個(gè)搖瓶中，加入適當(dāng)量的含清除劑（Scavengers）切割試劑三氟乙酸（TFA），10-25ml/g樹(shù)脂，蓋上蓋子，在室溫下進(jìn)行間歇式旋轉(zhuǎn)震蕩。抽濾樹(shù)脂，以新的TFA清洗樹(shù)脂2-3次，合并濾液，滴加8-10倍體積的冰乙醚。有時(shí)可以蒸掉部分TFA得到粗肽沉淀。乙醚可以用冰輔助降溫來(lái)提高沉淀效率。最后，收集下沉淀出來(lái)的多肽粗品。
適用樹(shù)脂：王樹(shù)脂或Rink Amide樹(shù)脂
2、弱酸法（稀釋的TFA或醋酸）
1% TFA：
將1g 掛有多肽的樹(shù)脂加入盛有含1%TFA的二氯甲烷溶液玻璃搖瓶，密封后震蕩2分鐘，用氮?dú)鈱V液壓入另一個(gè)新的盛有含10%吡啶的甲醇搖瓶中，重復(fù)上述操作10次。用30ml DCM, 30ml MeOH先后順序清洗殘留在樹(shù)脂上的保護(hù)多肽三次。以TLC或者HPLC檢查清洗殘留情況。合并所有濾液，并減壓蒸掉溶劑剩5%體積。加40ml水，并用冰冷卻混合物去輔助沉淀。過(guò)濾后，用清水清洗產(chǎn)品3次，放在真空干燥箱內(nèi)用KOH或者P2O5進(jìn)行干燥。
稀醋酸：
用AcOH/TFE/DCM（2:2:6）的切割液處理掛在樹(shù)脂上的多肽2小時(shí)，過(guò)濾樹(shù)脂，并用切割液洗滌樹(shù)脂三次?；旌蠟V液加入15倍體積的正己烷，旋蒸去除多余醋酸。多肽的回收方法詳見(jiàn)下文。
適用樹(shù)脂：2-CTC樹(shù)脂
